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胰蛋白酶的作用有哪些

发布时间:2022-12-12   点击次数:141次

胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 为蛋白酶的一种,EC 3.4.4.4,是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中,作为消化酶而起作用。在胰脏是胰蛋白酶的前体胰蛋白酶原被合成后,作为胰液的成分而分泌,受肠激酶,或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶,是肽链内切酶,它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用,而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体,起活化作用。是特异性*的蛋白酶,在决定蛋白质的氨基酸排列中,它成为*的工具。

胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在 pH 为 8.0 、温度为 37℃ 时,胰酶溶液的作用能力*。使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白质可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ,如: D-Hanks 液。终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
1. 称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度为 0.25 %,用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水(若用双蒸水需要调 PH 到 7.2 左右)或 PBS ( D-hanks )液中。搅拌混匀,置于 4℃ 内过夜。
2. 用注射滤器抽滤消毒:配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器( 0.22 微米微孔滤膜)抽滤除菌。
3. 分装成小瓶于 -20℃ 保存以备使用可。

胰蛋白酶-EDTA消化液(Trypsin-EDTA Solution)含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA(0.53mM),溶于无钙镁平衡盐溶液中,经过滤除菌,可以直接用于培养细胞和组织的消化。本产品具有方便快速、稳定安全、细胞状态好等特点。

产品说明:

在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散(将组织块制备成单个细胞悬液)以及传代细胞培养中,贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶,EDTA等,其功能主要是使细胞间的蛋白质(如细胞外基质)水解,使组织或贴壁细胞分散成单个细胞,制成细胞悬液用于进一步的实验。

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使用方法:

1. 贴壁细胞的消化:

a) 吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。

b) 加入少量胰蛋白酶消化液,盖过细胞即可,室温放置1-2分钟。不同的细胞消化时间有所不同,对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。

c) 显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。

d) 如果发现消化不足,可加入胰蛋白酶消化液重新消化。

e) 如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的*培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。

2. 组织的消化:

不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。


注意事项:

1.由于组织或细胞性质不同,实验人员应依据具体情况,确定最佳消化时间;消化细胞时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁和生长状况;

2.本产品不含抑菌剂,在使用过程中要特别注意无菌操作,避免消化液被微生物污染;

3.不宜4℃长期保存,切忌反复冻融,小量使用时建议分装冻存;

4.  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


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