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大鼠脂多糖结合蛋白试剂盒在样品收集前,这些知识点一定要知道

发布时间:2023-01-12   点击次数:92次
  大鼠脂多糖结合蛋白试剂盒检测灵敏度高,特异性强,重复性好,采用双抗体夹心ELISA法检测样品中大鼠LBP的浓度。大鼠LBP特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标准品或样品时,其中的大鼠LBP会与捕获抗体结合。当加入辣根过氧化物酶标记大鼠LBP抗体后,辣根过氧化物酶标记大鼠LBP抗体与大鼠LBP结合,形成夹心的免疫复合物。
 
  加入显色剂TMB溶液,固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。大鼠LBP浓度与A450值呈正比,通过绘制标准曲线,对照样品吸光度值,即可计算出样品中大鼠LBP浓度。
 
  大鼠脂多糖结合蛋白试剂盒样品收集:
  1、血清:全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内试管;
  2、血浆:抗凝剂推荐使用EDTA-Na2,样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,高血脂样品;
  3、组织匀浆:用预冷的PBS(0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测;
  4、细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测;
  5、其它生物样品:1000×g离心20分钟,取上清即可检测;
  6、样品应清澈透明,悬浮物应离心去除;
  7、样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃,避免反复冻融;
  8、如果您的样品中检测物浓度高于标准品较高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释。

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