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关于人白细胞介素elisa试剂盒的操作流程,以下有着详细说明

发布时间:2022-10-26   点击次数:41次
  人白细胞介素elisa试剂盒检测将纯化的人白细胞介素抗体涂于微孔板上,制成固相抗体。将白细胞介素依次加入包被单克隆抗体的微孔中,与HRP标记的白细胞介素抗体结合形成抗体-抗原-酶标记的抗体复合物。在清洗后,将基板TMB添加到颜色中。在使用之前,应在室温下将工具箱从冷藏环境中取出15-30分钟。如果打开后酶标板没有用完,应将酶标板存放在密封袋中。在使用之前,应在室温下将工具箱从冷藏环境中取出15-30分钟。如果打开后酶标板没有用完,应将酶标板存放在密封袋中。
 
  人白细胞介素elisa试剂盒检测的操作流程如下:
  1、待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
  2、酶标板置4℃,包被过夜。
  3、洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
  4、阴性对照孔每孔加入PBS50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
  5、酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  6、洗板,同(4)。
  7、每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液100μl。
  8、酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  9、洗板,同(4)。
  10、每孔加TMB显色液100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
  11、每孔加100μl2mol/LH2SO4终止反应。
  12、分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,最终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
  13、数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

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