大鼠促生长激素释放激素试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验。往预先包被大鼠促生长激素释放激素捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠促生长激素释放激素呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，计算样品浓度。
大鼠促生长激素释放激素试剂盒详细操作步骤如下：
1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃；
2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3、样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加；
4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min；
5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）；
6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min；
7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
操作注意事项：
1、试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存；
2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质；
3、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用；
4、使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器；
5、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品；
6、底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值；
7、加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样；
8、按照大鼠促生长激素释放激素试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
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